RA/CP-Detect


I. 측정원리 및 측정방법

AESKULISA RA/CP-Detect는 사람 혈청에서 사람 IgG의 특이적 합성물 cyclic

citrullinated peptides(CCP)에 대한 IgG 항체의 정량/정성 측정을 위한 solid phase 효소 면역 검사법 입니다.

1:101로 희석된 혈청 검체를 specific Antigen으로 코팅된 microplate well에서 incubation합니다. 검체에 존재하는 환자의 항체는 항원에 결합하고,

결합하지 않는 부분은 washing합니다. HRP에 결합된 사람 IgG 항체를 microplate

well에서 검체의 항원-항체 복합체와 결합되도록 incubation합니다.

결합하지 않은 복합체를 washing합니다. TMB-substrate를 분주하여 효소의 색채반응이 일어나고, Stop solution을 분주하면 반응이 정지됩니다. 색체 형성 비율은 항원-항체 복합체에 결합한 접합체의 양에 상관되고, 환자 검체에 있는 항체의 농도에 비례한다.


Ⅱ. 조제 방법

1. 시약조제

1) Sample buffer: 증류수로 5배  희석한다.

2) Wash buffer: 증류수로 50배 희석한다.

3) Negative Control: 그대로 사용한다.

4) Positive Control: 그대로 사용한다.

5) Cut-off Control: 그대로 사용한다.

6) Calibrator A-F: 그대로 사용한다.

7) IgG conjugate: 그대로 사용한다.

8) TMB substrate: 그대로 사용한다.

9) Stop solution: 그대로 사용한다.

10) Microplate : 그대로 사용한다.


2. 검체준비

혈청을 준비한다. 혈청은 즉시 사용해야 한다. 3일까지는 냉장보관(2-8℃)하고, 그렇지 않으면, 분주하여 얼린다.(-20℃). 황달이 있는 혈 지방혈, 용혈, 세균에 감염된 검체는 사용하지 않는다.

검체완충액으로 1:101로 희석한다.(10㎕ 검체 + 1000㎕ 검체완충액)


3. 검사 방법

1) 희석된 검체, Calibrator, cut-off control, positive, negative control을

   well에 100㎕씩 분주한다.

2) 실온에서 30분 동안 incubation한다.

3) washing solution으로 washing한다.(3회)

4) conjugate를 well에 100㎕씩 분주한다.

5) 실온에서 15분 동안 incubation한다.

6) washing solution으로 washing한다.(3회)

7) TMB substrate를 well에 100㎕씩 분주한다.

8) 햇볕이 들지않는 곳에서 15분 동안 incubation한다.

9) stop solution을 100㎕씩 분주하고, 5분 동안 incubation한다.

10) Stop solution을 분주하고 30분내에 450nm에서 흡광도를 측정한다.

- ETI-max3000, ETI-STAR 또는 이와 같은 기능을 가진 효소면역분석기를

  사용하여 분석함.

- 검체와 시약을 장착하면 저장된 검사방법에 따라 자동 분석됨.


4. 결과계산

- 자동화 장비(ETI-max3000, ETI-STAR 또는 이와 같은 기능을 가진 효소

  면역분석기)에 의해 정량/정성 결과가 자동적으로 산출된다.

5. 결과판정

1) 정량분석

   흡광도와 검정물질로 얻은 검정곡선에서 검체의 CP에 대한 IgG 항체값

   을 자동으로 산출한다.(참고값은 ≤15U/mL이다.)

2) 정성분석

   검체의 흡광도가 cut-off의 흡광도 보다 낮으면 음성으로, 높으면 양성으

   로 판정한다.





사 용 상 의 주 의 사 항


1. 체외 진단용 외 사용을 금지한다.

2. 보호 장갑과 보호 안경을 착용한다.

3. 유효기간이 지난 시약을 사용해서는 안 된다.

4. 제품번호가 다른 kit의 시약과 혼합하여 사용해서는 안 된다.


5. 모든 환자 검체는 전염성이 있는 것으로 간주하고, 합당한 규제에 따라

   취급, 폐기해야한다.

6. 시약이 생물학적으로 오염되지 안도록 한다.

7. 분석은 GLP에 따른다.

8. 검사는 정확하게 검사 방법에 따르고 정확하게 pipetting하여야 한다.

9. Stop solution과 TMB substrate는 피부에 염증을 일으키며, 눈에 해로우므

   로, 접촉했을 경우, 많은 양의 물로 씻고 의사의 진료를 받는다.

10. 이 제품에 포함된 방부제로 사용된 프로클린 300(60ppm)은 알레르기를 일

    으킬 수도 있으므로, 접촉했을 경우, 많은 양의 물로 씻고 의사의 진료를

   받는다.