Direct Enzymatic HbA1c Assay

 

규격 : Lysis Buffer : 1 x 30 ml

R1a : 1 x 16.8 ml

R1b : 1 x 7.2 ml

R2 : 1 x 10 ml

 

사용의도

Direct Enzymatic HbA1c 시약은 사람 전혈의 안정된 HbA1c를 정량 검출하도록 만들어졌다.

HbA1c의 측정은 오랜 당뇨 조절을 위한 소중한 표지자이다.

진단용으로만 사용 할 것.

 

임상적 중요성

HbA1c ADA(American Diabetes Association)에 의해 추천받은 중요한 검사이고,

그 유용성은 UKPDS(United Kingdom Prospective Diabetes Study) DCCT(Diabetes Control and Complication Trial)에 의해 명확해졌다.

현재 HbA1c 검사는 당뇨 환자 관리 프로그램의 부분으로서 매 2~3개월 당뇨관리를 하는 환자에 대하여 추천 되어진다.

GlycohemoglobinHemoglobin에서 amino 그룹에 glucose 의 비효소적 추가에 의해 생산되어진다.

HbA1c는 특히 헤모글로빈 베타 체인의 N-terminal valine residues로 당 변형 hemoglobin A를 나타낸다.

HbA1c검사는 혈당증 지표로서 그리고 당뇨 합병증의 발전에 대한 위험의 측정으로서 사용되어지고 있다.

그러므로 HbA1c 검사는 2~3개월 전에 당뇨증 조절에 좋은 지표자이다.

 

검사 원리

Direct Enzymatic HbA1c 검사는 Bacillus sp. 단백질 분해효소로 광범위분해를 받은 전혈의 효소적 검사이다.

이 과정은 헤모글로빈 베타 체인으로 부터 glycated valine을 포함하는 아미노산이 나온다.

다음에 glycated valineE.coli에서 생산된 특이적 재조합 FVO 에 대한 기질을 제공한다.

재조합 FVON-terminal valine으로 나누어지고 과산화수소를 생산한다.

이것은 차례로 반응을 촉진하는 POD와 적당한 chromagen을 사용하여 측정한다.

이 검사에는 Total Hemoglobin의 측정이 필요 없다.

HbA1c의 농도는 직접 적당한 calibration curve의 사용으로 %HbA1c로서 표현된다.

 

검사에 필요한 물질.

HbA1c Calibrator set.

Bi-level HbA1c control.

Direct Enzymatic HbA1c assay blank solution.

 

 

시약 준비

3종류의 시약을 사용하는 장비는 R1a, R1b, R2를 그대로 사용한다.

2종류의 시약을 사용하는 장비는 R1aR1b7:3비율로 섞어 overnight 후 사용한다.

 

시약 안정성 및 유효기간

시약은 2-8에서 유효기간 까지 유효하다. R1ab2-8에서 4주간 유효하다.

R1bR2는 빛에 민감하므로 주의해야한다.

 

검체 채취 및 조작

이 검사는 사람 전혈을 사용하도록 세심하게 만들어졌다.

정맥의 전혈을 채취하여 EDTA 항응고제로 처리하여 사용한다.

전혈은 냉장보관 할 때 2주 이내에 사용하는 것을 추천한다.

검사하기 전에 혈액은 가라앉은 적혈구가 잘 섞이도록 잘 섞어준다.

 

주의

1. R1b R2 시약은 빛에 민감하므로 어두운 장소에 보관한다.

2. 사람 으로부터 만들어진 검체는 잠재적인 감염의 위험이 있으므로 안전 검사 순서로

다루어야 한다.

3. 검사 결과는 모든 다른 검사 결과와 환자의 임상적 상태를 참조하여 설명되어야 한다.

4. 검사실에서 먹는 것을 피하고 피부와 눈이 닿지 않게 한다.

5. 유효기간이 지난 시약은 사용하지 말 것.

 

 

 

검사 순서

 

Whole Blood Lysis Procedure.

sample 컵에 Lysis 시약을 250 씩 분주한다.

검사 전에 전혈을 적혈구가 잘 섞이도록 5회이상 잘 섞어준다.

전혈이 완전히 섞이지 않으면 검사의 정확도에 영향을 미친다.

완전히 잘 섞인 전혈 20sample 컵에 분주한다.

거품이 생기지 않도록 pipettor로 부드럽게 섞어준다.

10분 동안 실온에서 방치하면 적혈구는 완전히 lysis 될 것이다.

완전히 용혈이 되면 작은 물질 없이 맑고 어두운 붉은 용액이 될 것이다.

용해 물질은 실온에서 4시간 동안 안정하다.

calibrator control 은 정확히 환자 검체처럼 다루어야 한다.

Direct Enzymatic HbA1c assay 시약은 산화환원반응으로 구성되어졌다.

이 검사에서는 시약 blank 또는 water blank는 사용하지 않는다.

Zero Calibrator를 구입하여 사용한다.

 

 

장비에 따른 분석 방법

3가지 시약을 사용할 수 있는 장비는 아래와 같이 진행한다.

HbA1c 검사는 endpoint 분석법이고 A1R2 시약이 분주되기 전이다.

 3HbA1c.jpg

 

2가지 시약을 사용할 수 있는 장비는 , 먼저 R1aR1b를 시약 준비에서 설명한대로 미리 준비한다.

HbA1c 검사는 endpoint 분석법이고 A1R2 시약이 분주되기 전이다.

 

 

 DZ168A.jpg

 

 

Calibration

Direct Enzymatic HbA1c assay 시약은 주간 단위로 calibration 한다.

모든 calibrator2-8에서 보관시 유효 기간까지 안정하고 분말로 되어 있다.

복원한 calibrator2-8에서 보관시 14일 동안 유효하다.

calibrator zeroopen , 2-8에서 보관시 14일 동안 안정하다.

 

 

정도 관리

Direct Enzymatic HbA1c control set는 두 개의 level로 되어 있다.

 

 

결과

HbA1c 농도는 적당한 calibration curve를 사용한 검사에 의해 % HbA1c 로서 나타낸다.

 

Reference range

정상인의 수치 3-6 % HbA1c.

조절하고 있는 환자의 수치 6-9 % HbA1c.

조절하지 않는 환자의 수치 20 % HbA1c 이상.

ADA에서는 7% HbA1c 이하를 추천한다. 그러나, 각 검사실은 국가, 나이, 성별등을 고려해서 세운다.

 

 

Limitations

* linearity12% HbA1c까지 이고, 12% HbA1c이상인 검체는 희석하여 재검사한다.

* EDTA로 처리된 전혈을 사용하고, Total Hemoglobin 수치는 9-21g/dl 이어야한다.

* 높은 HbF(>10%)는 부정확한 HbA1c 결과를 일으킬 수 있다.

 

 

 

 

Performance Characteristics

 

Accuracy

HPLC method와 비교.

 

Whole blood application

n

44

Slope

1.0212

Intercept

0.0135

Correlation coefficient

0.9874

Range of value

5%-13% HbA1c

 

Precision

 

Level 1 (%HbA1c)

Level 2 (%HbA1c)

Mean value

5.7 %

10.3 %

Within run SD(Swr)

0.06

0.07

Within run CV %

1.0 %

0.7 %

Inter assay precision

0.10

0.18

Inter assay precision

1.8 %

1.8 %

 

 

Linearity

4.0 % - 12.0 %